Valgu kvalitatiivne ja kvantitatiivne määramine uriinis. Uriini valgu analüüs: norm ja kõrvalekalded

Tavaliselt eritub valk uriiniga ebaolulistes kogustes (20–150 mg / päevas), sellised kontsentratsioonid ületavad tavapäraste rutiinsete meetodite tundlikkust, seetõttu ei tuvastata valku tavaliselt terve inimese uriinis. Proteinuuria loetakse tuvastatuks, kui valgu eritumine ületab 300 mg päevas.

Eristage füsioloogilist ja patoloogilist proteinuuriat. Füsioloogilise (funktsionaalse) proteinuuria korral võib valgu suurenenud eritumine uriiniga olla tingitud teatud haigustest ja teatud füsioloogilistest seisunditest. Valgusisaldus patsientide uriinis normaliseerub pärast sellise proteinuuria põhjuste kõrvaldamist, mille hulka kuuluvad füüsiline koormus, stress, hüpertermia, jahutamine, kongestiivne südamepuudulikkus, rasedus.

Patoloogiline proteinuuria ei ole alati seotud neeruhaigusega, eristage prerenaalset, neeru- ja postrenaalset vormi (tabel).

Prerenaalne proteinuuria tekib uriini sisenemise tõttu terve neerufiltri kaudu, mis ringleb veres suhteliselt kõrges kontsentratsioonis madala MM-iga patoloogilisi valke. Selliste valkude kontsentratsiooni suurenemist veres täheldatakse immunoglobuliini kergete ahelate sünteesi, intravaskulaarse hemolüüsi ja kudede hävimise korral.

Neerude proteinuuria mis on põhjustatud neerude glomerulite ja/või tuubulite kahjustusest.

Glomerulaarne (glomerulaarne) proteinuuria areneb glomerulaarfiltri kahjustuse tagajärjel, mille tagajärjeks on filtreerimine ja difusioon glomerulites. Sõltuvalt glomerulite düsfunktsiooni astmest eristatakse selektiivset ja mitteselektiivset proteinuuriat, kusjuures viimane uriinis koos madala molekulmassiga ilmuvad peaaegu kõik suure molekulmassiga valgud.

Kell torukujuline (torukujuline) proteinuuria uriinis suureneb madala molekulmassiga valkude hulk nende reabsorptsiooni mehhanismide rikkumise tõttu proksimaalsetes tuubulites. Iseloomulik on madala MW (alla 40 KDa) valkude eritumine uriiniga. See vorm esineb lisaks ägedale ja kroonilisele neeruhaigusele ka raskmetallide, toksiliste ühenditega mürgistuse ja nefrotoksiliste ravimite võtmise korral. Tubulaarse proteinuuria väljakujunemise peamine marker on β2-mikroglobuliini sisalduse suurenemine uriinis.

Postrenaalne proteinuuria avaldub põletikuliste protsesside esinemisel kuseteedes ja suguelundites (koos tsüstiidi, püeliidi, prostatiidi, uretriidi, vulvovaginiidiga) või sama lokaliseerimisega pahaloomuliste protsesside korral. Seda tüüpi proteinuuria diagnoosimiseks kasutatakse mikroskoopilisi meetodeid, mis tuvastavad kasvaja- või põletikurakud uriinis.

Valgu kontsentratsiooni määramine uriinis tekitab teatud raskusi: valkude heterogeenne koostis tingib vajaduse valida meetod, mis võimaldab teil samaaegselt määrata kõiki uriini valke. Üldvalgu määramine on teatud kompromiss, kuna veel puudub meetod, mis võimaldaks määrata kogu uroproteiinide spektrit, mis võib hõlmata erinevaid vereseerumi ja kudede valke. Praegu kasutatakse proteinuuria laboratoorseks diagnoosimiseks kvalitatiivseid, poolkvantitatiivseid ja kvantitatiivseid meetodeid.

Nimi Põhjus Valgud uriinis
Prerenaalne vorm
Ülevoolu proteinuuria
Paraproteiini sünteesi kõrge tase (hulgimüeloom ja muu amüloidoos) Bens-Jonesi valk ja muud paraproteiinid
Koevalkude suurenenud lagunemine (raske hemolüüs, rabdomüolüüs, müopaatia, leukeemia) Hemoglobiin, müoglobiin, lüsosüüm
Neerude vorm Glomerulaarne või glomerulaarne Glomerulaarfiltri selektiivse läbilaskvuse rikkumine selektiivne proteinuuria – valgud, mille molekulmass on vaid alla 150 kDa; mitteselektiivne proteinuuria - mis tahes valgud, sh. mille MM on üle 150 kDa
Torukujuline või torukujuline Kahjustatud tubulaarne reabsorptsioon Madala molekulmassiga valkude eraldamine (MW alla 40 kDa)
Segatud Glomerulaarfiltri selektiivse läbilaskvuse ja tuubulites reabsorptsiooni rikkumine Madala ja suure molekulmassiga valkude eraldamine
Postrenaalne vorm Põletikulise eksudaadi sattumine uriini põie, suguelundite kuseteede haiguste korral Tamm-Horswalli valk, IgA, vereplasma valgud

Näidustused uuringuks

  • Neerukahjustuse sõeluuring (pärast neerusiirdamist, glomerulonefriidi, püelonefriidi jne korral);
  • arteriaalne hüpertensioon;
  • mürgistus raskmetallidega, nefrotoksilised ravimid;
  • süsteemsed haigused (tsirroos, sarkoidoos jne);
  • nakkushaigused;
  • Rasedus.

Uurimismeetod:

Kvalitatiivsed meetodid valgu tuvastamiseks uriinis põhinevad valkude denatureerumisvõimel erinevate füüsikaliste ja keemiliste tegurite mõjul. Kvalitatiivsed meetodid valgu määramiseks uriinis on järgmised: Gelleri ringtest, proov 15–20% sulfosalitsüülhappega, keemiskatse. Valgu kvalitatiivse määramise meetodid uriinis ei anna usaldusväärseid ja reprodutseeritavaid tulemusi.

Poolkvantitatiivsed meetodid praegu rakendatakse neid peamiselt kuivkeemia meetoditel diagnostiliste ribade (testribade) kujul koos tulemuse hindamisega visuaalselt või uriinianalüsaatorite abil. Valgu poolkvantitatiivseks määramiseks uriinis on kõige sagedamini kasutatav värvaine bromofenoolsinine, mis on albumiini suhtes tundlikum kui teised valgud – globuliinid, mukoproteiinid, hemoglobiin ja Bens-Johnsoni valk. See ribade omadus muudab need sobivaks selektiivse proteinuuria tuvastamiseks, kui peaaegu kogu valk on albumiin, kuid põhjustab valenegatiivseid tulemusi muud tüüpi proteinuuria puhul.

Kvantitatiivsed meetodidÜldvalgu määramine uriinis hõlmab turbidimeetriline ja nefelomeetriline, samuti kolorimeetriline.

Turbidimeetrilised ja nefelomeetrilised meetodid põhinevad uriini valkude lahustuvuse vähenemisel, mis on tingitud suspendeeritud osakeste suspensiooni moodustumisest sadestavate ainete mõjul. Uuritava proovi valgusisaldust hinnatakse kas valguse hajumise intensiivsuse (nefelomeetria) või saadud suspensiooni valgusvoo nõrgenemise järgi (hägusus).

Kolorimeetrilised meetodid põhinevad valkude spetsiifilistel reaktsioonidel kromogeenidega, on tekkiva värvuse intensiivsus võrdeline uuritava aine kontsentratsiooniga.

Proteinuuria raskusastme ja esinemismehhanismi kindlakstegemiseks kvalitatiivsete või poolkvantitatiivsete meetoditega uriinis sisalduvate valgusisalduse suurendamisel on soovitatav mitte ainult määrata selle kvantitatiivne sisaldus, vaid hinnata ka valgu spektri muutusi. uriini elektroforeesi meetodil või üksikute uriinivalkude kontsentratsiooni määramiseks immunokeemiliste meetoditega.

Suurenenud väärtused

  • Glomerulaarfiltratsiooni häired;
  • torukujulise reabsorptsiooni rikkumine;
  • hulgimüeloom, amüloidoos;
  • Waldenstromi makroglobulineemia;
  • monotsüütiline leukeemia;
  • põletused, intravaskulaarne hemolüüs, rabdomüolüüs;
  • nakkusprotsessid, kehatemperatuuri tõus;
  • äge pankreatiit, tsirroos, hepatiit;
  • süsteemsed haigused;
  • pahaloomulised kasvajad või kuseteede, suguelundite põletik;
  • südamepuudulikkuse;
  • raskmetallide mürgistus;
  • aminoglükosiidide, nefrotoksiliste ravimite kasutamine;
  • hüpotermia.

Enamiku neerupatoloogiate areng erineb selle poolest, et neil võib olla üsna pikk varjatud (varjatud) periood. Seetõttu on selline analüüs määratlusena paljude erialade arstide jaoks kahtlemata kõige olulisem.

Nefroni funktsioon ja proteinuuria

Ultrafiltratsiooni käigus satub primaarsesse uriini suur hulk erinevaid valgumolekule ja aminohappeid. Pole üllatav, et enamiku valkude keskmine suurus ületab membraani läbimise läve. Ja aminohappe molekulid on polaarselt laetud. See mängib rolli ka nende "peetuses" membraanide pinnal. Kuid primaarse uriini läbimisel läbi nefroni tuubulite reabsorbeeritakse (reabsorbeeritakse) verre peaaegu kõik valgud ja aminohapped. Seetõttu ei tohi sekundaarne uriin sisaldada rohkem kui sajandikku grammi valke.

Tavaliste meetoditega uriinis sisalduva valgu määramisel ei tohiks normaalarvud ületada 0,033 grammi liitri kohta. Täiskasvanud terve inimene saab päevas eraldada kuni 0,15 grammi. Veelgi enam, umbes 1-2% neist on albumiin. Ülejäänud 90% on (neid on umbes 30 tüüpi) ja glükoproteiinid - membraanide peamised valgud. Viimased ilmuvad uriinis podotsüütide aktiivsuse tõttu. Kuna iga raku töö ajal on membraani püsiv kahjustus vältimatu. Kuid see kahju ei ole esiteks märkimisväärne ja teiseks "pinguvad" need kiiresti selle pidevate regenereerimisprotsesside tõttu. Need 90% hõlmavad ka mukoproteiine - valgumolekule, mis sisenevad Henle ahela epiteeli töö ajal tuubulite valendikku.

Proteinuuriat on mitut tüüpi. Need on ehitatud ainult igapäevase valgu uriinianalüüsi põhjal.

  • Normaalne proteinuuria. Valgu vabanemine ei ületa juba teadaolevat 0,15 grammi päevas.
  • Mõõdukas proteinuuria. Eksponeeritakse, kui eraldis on üle 0,15, kuid alla 3,5 grammi päevas.
  • Massiivne proteinuuria tähendab, et neerud eritavad 24 tunni jooksul rohkem kui 3,5 grammi valgumolekule.

Proteinuuria põhjused ja selle arengu mehhanismid

Ultrafiltratsiooni ja reabsorptsiooni peamiste mehhanismide kohaselt võib uriiniga eritunud valgu liigne kogus tuleneda tuubulite, glomerulite ja kuseteede kahjustusest.

  • Glomerulite lüüasaamine. Viib nn glomerulaarse proteinuuria tekkeni. Normaalsetes tingimustes säilitavad valgud membraani. Selle pooridest pääseb läbi vaid väike kogus. Seetõttu ei ole torukesed ette nähtud spetsiaalsete mehhanismide olemasoluks valkude reabsorptsiooniks, mis praktiliselt sinna ei jõua. Siin räägime albumiinist. Kuigi podotsüütide membraanid hoiavad neid kinni, ei satu primaarse uriini koostisse rohkem kui 2%, kuna negatiivse laengu tõttu jäävad need alusmembraanidele ega sisene nefronikapsli õõnsusse. Kui aga membraan on hävinud, tormavad albumiinid kapsli õõnsusse ega imendu enam tuubulitest tagasi. Sellepärast täheldatakse glomerulaarpatoloogiaga väikest proteinuuria taset: albumiini erikaal ei võimalda uriinis valgu määramiseks kasutatavatel indikaatoritel tugevamalt reageerida.
  • Tubulaarne patoloogia. Ultrafiltreerimine pole siin häiritud. Kuna reabsorptsioon kannatab, on proteinuuria absoluutne aste märkimisväärne, kuna sekundaarses uriinis sisaldub suur hulk jämedaid valke. Kuid ka siin tuleb teha reservatsioon, et selle määramiseks on vaja tundlikumaid näitajaid. Kuna enamiku nende toime on suunatud laetud valguosakeste hulga määramisele. Need on esiteks albumiin ja mis sellistes olukordades oluliselt ei suurene või on üldiselt normi piires. Sellega seoses võib uriini üldvalgu analüüs anda valed tulemused proteinuuria tegeliku suuruse kohta.

Valgu määramine uriinis

See on tähtis! Peamine proteinuuria registreerimise meetod on uriini valguanalüüs. Milleks kasutatakse erinäitajaid? Enamiku nende indikaatorpulkade tundlikkuse miinimumlävi on 30 milligrammi liitri kohta.

Siinkohal tuleb aga meeles pidada, et testriba on valgukontsentratsiooni suhtes tundlik selle pinnast sajandikmillimeetri raadiuses. Seetõttu näitab riba väga lahjendatud uriini korral negatiivset tulemust, isegi kui proteinuuria on suurem kui 50 või isegi 70 mg.

Laboratoorsete diagnostikameetodite selliste "puuduste" vältimiseks on uriini uurimine kõige parem teha hommikul, kui selle kontsentratsioon on kõrgeim. Kui üldanalüüsis tuvastatakse proteinuuria üle 0,033 g / l, tehakse selle kinnitamiseks päevase valgusisalduse uuring.

Paljud haigused kulgevad ilma väljendunud kliiniliste ilminguteta, seetõttu on praktilise meditsiini jaoks oluline punkt valgu määramine uriinis patoloogilise seisundi õigeaegseks tuvastamiseks ja raviks.

Valku uriinis saab määrata kvalitatiivselt ja kvantitatiivselt.

Kvalitatiivsed meetodid


Praegu on teada umbes 100 kvalitatiivset reaktsiooni valkudele. Need seisnevad valgu sadestamises füüsikaliste või keemiliste mõjude toimel. Positiivse reaktsiooni korral tekib hägusus.

Kõige informatiivsemad testid on:

  • Sulfosalitsüülhappega. Seda peetakse kõige tundlikumaks ja selle abiga on võimalik määrata isegi väikseimad valgukehade kogused uriinis. Tulemuse kirjeldust valgu jäljega tähistatakse terminiga "opalestsents" ja suurema koguse korral - "kergelt positiivne", "positiivne" ja suure valgukaotusega uriinis - "tugevalt positiivne reaktsioon". .
  • Happeasendajaga - aseptool. Uriinile lisatakse aine lahus ja kui lahuste piirile tekib rõngas, öeldakse, et proov on positiivne.
  • Geller. Seda toodetakse lämmastikhappe lahuse abil. Käitumise tulemust tõlgendatakse samamoodi nagu aseptooli puhul. Mõnikord võib rõngas esineda uraatide esinemise ajal uuritavas vedelikus.
  • Äädikhappega, millele on lisatud kaaliumspleistotsüaniidi. Kui sellise testi ajal on uriini kõrge kontsentratsioon, see lahjendatakse, vastasel juhul võib saada valepositiivse tulemuse, kuna reaktsioon on uraadile ja kusihappele.

Sellise testi ebaõige läbiviimine võib vastsündinutel sageli anda vale tulemuse, kuna nende uriin moodustub suure kusihappesisaldusega.


Proovide võtmise põhireeglid on järgmised - uuritav uriin peab olema läbipaistev, nõrgalt happelise keskkonnaga (selleks lisatakse mõnikord väike kogus äädikhapet), kontrollimiseks peaks olema kaks katseklaasi .

kvantifitseerimine


Uriinianalüüsi tegemisel määratakse ka koguvalgu kogus. Neid on palju, kuid kõige sagedamini kasutatakse järgmisi:
  • Esbachi meetod. Seda on kasutatud alates 19. sajandist. Selleks valatakse uriin ja reaktiiv konkreetsesse katseklaasi. Seejärel loksutatakse segu veidi ja jäetakse avamata 24-48 tunniks. Saadud sete loendatakse katseklaasis jagamise teel. Õige järelduse saab teha ainult happelise uriiniga. See tehnika on üsna lihtne, kuid sellel pole suurt täpsust ja see on aeganõudev.
  • Brandberg-Stolnikovi meetod. Põhineb Gelleri testil, mille tulemuseks on valgukontsentratsioonid üle 3,3 mg%. Hiljem seda meetodit muudeti ja lihtsustati.
  • Laialdaselt kasutatakse nefelomeetrilisi meetodeid valgu koguse määramiseks.
Valgukoguse täielikuks mõistmiseks on kõige parem kasutada igapäevase valgu jaoks uriinianalüüsi.
  • Õige tulemuse saamiseks valatakse esimene hommikune portsjon välja, kogumine algab teisest portsjonist ühes anumas, mida on soovitatav hoida külmkapis.
Viimane osa koristatakse hommikul. Pärast seda on vaja mõõta maht, seejärel segada hoolikalt ja valada purki kuni 50 ml portsjon. See konteiner tuleb laborisse üle anda. Spetsiaalsel vormil tuleb märkida kogu päevase uriinimahu tulemused, samuti patsiendi pikkus ja kaal.

Testribade kasutamine


Uriini valgu test töötab indikaatorite põhimõttel. Spetsiaalsed ribad võivad muuta oma värvi sõltuvalt valgu kontsentratsioonist. Need on mugavad erinevatel aegadel toimuvate muutuste tuvastamiseks ning neid kasutatakse nii kodus kui ka igas ravi- ja ennetusasutuses.

Uriini testribasid kasutatakse siis, kui on vaja varakult kindlaks teha ja jälgida urogenitaalsüsteemi patoloogiate ravi tulemusi. See diagnostiline meetod on tundlik ja reageerib albumiinile selle kontsentratsioonis alates 0,1 g / l ning võimaldab teil määrata uriini valgusisalduse kvalitatiivset ja poolkvantitatiivset muutust.

Selle diagnoosi tulemuste põhjal on võimalik jälgida ravi efektiivsust, teha selles muudatusi ja määrata vajalik dieet.

Uriini valgu määramise töökoht sisaldab järgmisi elemente:

  1. Keemilised katseklaasid, aglutinatsioon.
  2. Gradueeritud pipettide komplekt.
  3. Kitsa, sissetõmmatud otsaga pipetid.
  4. Alkohollambid või gaasipõleti.
  5. Must paber.
  6. Jää-äädikhape.
  7. Sulfosalitsüülhape.
  8. Kontsentreeritud lämmastikhape.
  9. Destilleeritud vesi.

Valgu määramise meetodid uriinis

Kõik meetodid, mida kasutatakse valgu kvalitatiivseks määramiseks uriinis, põhinevad valkude hüübimisel. Valkude koagulatsioon avaldub erineva hägususe (opalestsentsist kuni suure hägususeni) või flokulatsioonis.

Valgu kvalitatiivset määramist uriinis saab läbi viia ühel järgmistest viisidest:

  1. keetmine 10% äädikhappe lahusega;
  2. reaktsioonil 20% sulfosalitsüülhappe lahusega;
  3. reaktsioon 50% lämmastikhappe lahusega (Gelleri test);
  4. reaktsioon 1% lämmastikhappe lahusega naatriumkloriidi küllastunud lahuses (Larionova järgi modifitseeritud Gelleri test).

Enne valgu kvalitatiivset määramist uriinis tehakse järgmised ettevalmistustööd:
1. Hägune uriin filtreeritakse läbi paberfiltri. Kui selget filtraati ei ole võimalik saada, korrake filtreerimist läbi sama filtri või segage uriin väikese koguse infusioonimulda või talgiga, misjärel see filtreeritakse.
2. Kui uriin on leeliselise reaktsiooniga, hapestatakse see 10% äädikhappe lahusega lakmuse või universaalse indikaatorpaberi kontrolli all nõrgalt happeliseks reaktsiooniks.
3. Madala soolasisaldusega (helekollane või kahvatukollane väikese erikaaluga uriin).
proovile lisatakse mõni tilk naatriumkloriidi küllastunud lahust, kuna soolade puudumine põhjustab valgu koaguleerumist.
4. Hägususastet jälgitakse musta taustaga. Taustana kasutatakse fotograafias kasutatavat musta pappi või musta paberit. Võttes arvesse reaktsiooni mustal taustal, ilmneb vähimgi hägusus.

Nummerdatud torud asetatakse eraldi riiulisse. Nad tekitavad ühe allpool kirjeldatud reaktsioonidest.

1. Proovi võtmine keetes 10% äädikhappe lahusega. Selle katse tegemiseks on vaja 10% äädikhappe lahust, mis valmistatakse järgmiselt: 10 ml jää-äädikhapet asetatakse silindrisse ja lisatakse destilleeritud vett kuni 100 ml märgini.

Valkude määramise tehnika. 10-12 ml kergelt happelise reaktsiooniga filtreeritud uriini pannakse keemilise katseklaasi. Seejärel kuumutatakse katseklaasi ülemine osa uriiniga ettevaatlikult keemiseni ja sellele lisatakse 8-10 tilka 10% äädikhappe lahust. Katseklaasi uriiniga vaadatakse läbiva valguse taustal mustal taustal. Valgu olemasolul uriinis ilmneb erineva raskusastmega hägusus (opalestsentsist kuni suure hägususeni) või helbed langevad välja. Toru alumine osa, mida pole kuumutatud, toimib juhtseadmena. See test tuvastab valgu kogust alates 0,015% o (% o-promille).

2. Reaktsioon 20% sulfosalitsüülhappe lahusega. Sulfosalitsüülhappe 20% lahus valmistatakse järgmiselt: 20 g sulfosalitsüülhapet lahustatakse 70-80 ml destilleeritud vees, kantakse 100 ml silindrisse ja täidetakse uuesti destilleeritud veega märgini. Valmistatud reaktiivi hoitakse pimedas klaasanumas.

Valkude määramise tehnika. Kahesse sama läbimõõduga katseklaasi asetage 2-3 ml kergelt happelise reaktsiooniga filtreeritud uriini, ühte katseklaasi lisatakse 3-4 tilka 20% sulfosalitsüülhappe lahust, teine ​​katseklaas toimib kontrollina. . Kui reagenditorus on valku, ilmneb hägustumine või kalgendatud valgu helbed kukuvad välja. Kontrolltorus jääb vedelik selgeks. Sulfosalitsüülhape sadestab koos vadakuvalguga albumoosid (peptiidid), mis on valkude lagunemissaadused. Uriini hägususe põhjuse selgitamiseks soojendatakse uriiniga katseklaasi. Vadakuvalkude poolt põhjustatud hägusus suureneb, albumoosi esinemisest tingitud hägusus aga kaob. Sellel testil on sama tundlikkus kui eelmisel.

3. Reaktsioon 50% lämmastikhappe lahusega (Gelleri test). 50% lämmastikhappe lahus valmistatakse järgmiselt: 50 ml lämmastikhappele lisatakse 50 ml destilleeritud vett erikaaluga 1,2–1,4 (lahjendus 1:1).

Valkude määramise tehnika. Kitsasse väikesesse katseklaasi (aglutinatsioonimuda) valatakse 1 ml 50% lämmastikhapet. Võtke kitsa tõmmatud otsaga pipetti 1 ml filtreeritud testuriini, asetage see reaktiivile ja viige katseklaas vertikaalsesse asendisse. Valgu olemasolul ilmub vedelike piirile valge rõngas. Sõrmuse ilmumise aeg, omadused sõltuvad valgu hulgast: kui valku on vähe, siis sõrmus ei teki kohe, seetõttu jälgitakse selle välimust 2,5-3 minutit. Selle meetodiga määratud minimaalne valgu kogus on 0,033 ° / oo. Väiksema valgusisaldusega uriinis rõngast ei teki. Reaktsiooni tulemusi võetakse arvesse läbiva valguse mustal taustal.

4. Reaktsioon 1% lämmastikhappe lahusega naatriumkloriidi küllastunud lahuses on modifitseeritud Gelleri test (Larionova järgi). Katse läbiviimiseks kasutatakse 1% lämmastikhappe lahust, mis on valmistatud naatriumkloriidi küllastunud lahuses (Larionova reaktiiv). 35 g naatriumkloriidi lahustatakse 100 ml destilleeritud koldes, lahus filtreeritakse, 99 ml valmistatud naatriumkloriidi küllastunud lahust lisatakse 1 ml kontsentreeritud lämmastikhappele erikaaluga 1,2-1,4.

Valkude määramise tehnika sama, mis reaktsioonis 50% lämmastikhappe lahusega (Gelleri test), kuid 1 ml 50% lämmastikhappe lahuse asemel valatakse katseklaasi 1 ml Larionova reaktiivi ja 1 ml uriini kihiti selle peale. Valge rõnga ilmumine vedelike piiril näitab valgu olemasolu uuritavas uriinis. Larionova test on sama tundlik kui Gelleri test.

5. Kolorimeetriline (kuiv) proov valgu kvalitatiivseks määramiseks. Kolorimeetriline (kuiv) test valgu kvalitatiivseks määramiseks uriinis põhineb valgu mõjul indikaatori värvile puhverlahuses.

Valkude määramise tehnika. Valgu määramiseks mõeldud testpaberitükk kastetakse lühikeseks ajaks uriini. Test loetakse positiivseks, kui paberitükk muutub sinakasroheliseks.

Valgu kvantifitseerimine uriinis

Valgu kvantitatiivne määramine uriinis põhineb asjaolul, et kui valku sisaldav uriin asetatakse 50% lämmastikhappe lahusele või Larionova reagendile, moodustub kahe vedeliku piiril valge rõngas ja selge valge rõnga ilmumisel. 3 minutiga, siis on valgusisaldus 0,033% umbes ehk 33 mg 1000 ml uriinis. Rõnga ilmumine varem kui 3 minutit viitab suuremale valgusisaldusele uriinis.
Valgu määramisel uriinis järgitakse järgmisi reegleid:

  1. Valku kvantifitseeritakse ainult nendes uriiniosades, kus see on kvalitatiivselt tuvastatud.
  2. Määramine tehakse hoolikalt filtreeritud uriiniga.
  3. Täpselt järgitakse testitava uriini kihistamise tehnikat 50% lämmastikhappe lahusele või Larionova reagendile reaktiivi ja uriini vahekorras (1:1).
  4. Sõrmuse ilmumise aja määrab stopper: valgukoguse lõplikul arvutamisel võetakse arvesse uriini lämmastikhappele kihistumise aega, mis on 15 sekundit.
  5. Uriini lahjendamine toimub rõnga omaduste põhjal. Lisaks valmistatakse iga järgnev uriinilahjendus eelmisest.
  6. Sõrmuste määratlus on tehtud mustal taustal.

Kõige tavalisemad kaks meetodit valgu kvantitatiivseks määramiseks uriinis: Roberts-Stolnikov-Brandbergi meetod ning S. L. Ehrlichi ja A. Ya. Althauseni meetod.

  1. Roberts-Stolnikov-Brandbergi meetod. Selle meetodi kohaselt määratakse valgu kogus uriinis, lahjendades seda seni, kuni järgmise uriinikihiga 50% lämmastikhappe lahusele või Larionova reagendile ilmub ring täpselt 3 minuti pärast. Valgu koguse arvutamiseks korrutatakse 0,033% o uriini lahjendusastmega. Saadud tulemus väljendab valgu kogust milligrammides 1000 ml uriini kohta, s.o promillides (% o).
  2. S. L. Ehrlichi ja A. Ya. Althauseni meetod. Riiulisse asetatakse hulk aglutinatsioonikatseklaase, kuhu eelnevalt valatakse 1 ml 50% lämmastikhappe lahust või Larionova reaktiivi. Uuritav uriin võetakse eraldi puhta ja kuiva kitsa, väljatõmmatud otsaga pipetiga ja kantakse kihiti reaktiivile, mille järel lülitatakse sisse stopper. Sõrmuse ilmumise aega jälgitakse katseklaasi asetamisega mustale taustale. Kui rõngas ilmub, lülitub stopper välja.

Uriini kihistamisel võib olenevalt valgu kogusest tekkida kompaktne, lai või niiditaoline rõngas. Kompaktne lai ring ilmub kohe pärast uriini ladestumist reaktiivile. Keermerõngas võib ilmuda kohe, enne ühe minuti möödumist või intervalliga 1–4 minutit.

Kui ühe kuni 4 minuti jooksul tekib niiditaoline rõngas, pole uriini lahjendamist vaja!
Valgu koguse arvutamiseks sel juhul piisab autorite pakutud tabeliplaanist (tabel 1).

Näide 1. Kui uriin kanti reaktiivile, tekkis 2 minuti pärast niidilaadne rõngas. Kui rõngas tekkis 3 minutiga, oleks valgu kogus 0,033% umbes.

Sel juhul tekkis rõngas varem. Vastav parandus, vastavalt kavatabelile, ajale 2 minutit on 1 + 1/8. See tähendab, et teatud uriiniosas on valku 1 + 1/8 korda rohkem kui 0,033 ° / oo, st 0,033% o X (1 + 1/8) = 0,037 ° / oo.

Kui filamentne rõngas ilmub kuni 1 minuti pärast, st 40-60 sekundi pärast, tehakse üks uriini lahjendus 1,5 korda (2 osa uriini + 1 osa vett) ja seejärel kantakse lahjendatud uriin uuesti reaktiivile. ja sõrmuse välimus registreeritakse. Tulemuste arvutamisel võetakse arvesse, et uriin lahjendati 1,5 korda.

Näide 2. Pärast 1,5-kordselt lahjendatud uriini kihistamist ilmnes filamentne rõngas 2 minuti pärast. Kui rõngas ilmuks 3 minuti pärast, oleks valk 0,033%. Vastav parandus vastavalt tabeliplaanile 2 minuti jooksul on 1 + 1/8. Valk uriinis sisaldab 0,033% oX1,5X (1 + 1/8) = 0,056% o.

Kui niidilaadne rõngas kohe ilmub, lahjendatakse uriini 2 korda (1 osa uriini + 1 osa vett). Lahjendatud uriin kantakse uuesti reaktiivile ja 1 minuti pärast märgitakse rõnga välimus.

Näide 3. Reagendile 2 korda lahjendatud uriini kihistamisel tekkis 1 minuti ja 15 sekundi pärast niidilaadne rõngas. Seejärel võrdub valgu kogus uuritavas uriinis analoogselt eelmiste arvutustega
0,033% oX2X (1 + 3/8) = 0,091%.
Kui ilmub lai ring, lahjendatakse uriini 4 korda (1 osa uriini + 3 osa vett).
Lahjendatud uriini järgneva kihistumisega võib nii enne kui ka pärast minutit tekkida niitjas rõngas. Sellistel juhtudel arvutatakse valgu kogus analoogselt eelmiste näidetega, see tähendab, et 0,033% o korrutatakse lahjendusastmega ja vastava korrektsiooniga.

Näide 1. Rõngas tekkis kohe peale uriini 4 korda lahjendamist. Uriini lahjendatakse 2 korda. Pärast 8 korda (4X2) lahjendatud uriini kihistamist tekkis filamentne rõngas 1,5 minuti pärast. Sel juhul on valgu kogus 0,033% oX8X1,25 = 0,33% o jne.
Kui ilmub kompaktne rõngas, lahjendatakse uriini 8 korda (1 osa uriini + 7 osa vett). Lahjendatud uriini järgneval kihistamisel reagendile võib moodustuda kas kompaktne, lai või niiditaoline rõngas.

Näide 2. Kui uriin kanti lämmastikhappele, tekkis kohe kompaktne rõngas. Uriini lahjendatakse 8 korda (1 osa uriini + 7 osa vett) ja kihitakse uuesti. Selle tulemuseks oli taas kompaktne rõngas. Seejärel lahjendatakse uriini veel 8 korda (selleks võetakse 1 osa lahjendatud uriinist silindrisse või katseklaasi ja lisatakse 7 osa vett). Pärast lahjendatud uriini järjekordset kihistamist tekkis kohe filamentne rõngas. Uriini lahjendatakse 2 korda (1 osa uriini + 1 osa vett). Pärast lahjendatud uriini järgmist kihistamist tekkis filamentne rõngas 2 minuti pärast. Valgu kogus uriini antud portsjonis arvutatakse järgmiselt: 0,033,% oX8X8X2X (1 + 1/8) = 4,8% o.

Lisaks plaanitabelile on tabel arvutatud valguarvudega (tabel 2). Kui uriin ei ole lahjendatud, leitakse valgu kogus veerust "Terve lahjendamata uriin". Uriini lahjendamisel terve arv kordi (8,4,2) kasutage tabelit. 1. Uriini 1,5-kordsel lahjendamisel kasutage tabelit. 2.

Tabeli kasutamise tehnika uriini valgusisalduse määramiseks

Tabeli vastavates veergudes on näidatud rõnga ilmumise aeg ja uriini lahjendusaste.
Nendest kahest indikaatorist tõmmatud horisontaalsete ja vertikaalsete joonte ristumiskohas asuv joonis näitab valgu kogust uuritavas uriinis (% o).

Võimalik, et valgutsükli positiivse kvalitatiivse testiga 50% lämmastikhappe lahusele kihistades lahust ei moodustu. See tähendab, et valku uriinis on alla 0,033% o. Sellistel juhtudel nimetatakse valgu kogust analüüsilehel "jälgedeks".

Kui valk on kvantifitseeritud, märgitakse uriinianalüüsi vormile valgusisaldus promillides, näiteks "valk - 0,66% o".

Lisaks valgu kvantitatiivsele määramisele uriini eraldi portsjonis arvutatakse selle päevane kogus grammides. Selleks kogutakse päevane uriin, mõõdetakse selle kogus ja määratakse valgusisaldus promillides. Seejärel tehakse arvutus. Näiteks uriini päevane kogus on 1800 ml, valk on 7 ° / oo. See tähendab, et valk päevases uriinikoguses sisaldab: 1,8X7 = 12,6 g.

Tavalised näitajad: valk sisaldub uriinis tavaliselt minimaalsetes kogustes, mida tavalised kvalitatiivsed reaktsioonid ei tuvasta. Valgu normi ülempiir uriinis on 0,033 g / l. Kui valgusisaldus on sellest väärtusest suurem, muutuvad valgu kvalitatiivsed testid positiivseks.

Määratluse kliiniline tähtsus:

Valgu ilmumist uriinis nimetatakse proteinuuriaks. Proteinuuria võib olla vale ja renaalne. Ekstrarenaalne proteinuuria võib olla suguelunditest pärinevate valguliste lisandite (vaginiit, uretriit jne) juuresolekul, samas kui valgu kogus on ebaoluline - kuni 0,01 g / l. Neerude proteinuuria võib olla funktsionaalne (hüpotermia, füüsilise koormuse, palavikuga) ja orgaaniline - glomerulonefriidi, püelonefriidi, nefriidi, nefroosi, neerupuudulikkusega. Neerude proteinuuria korral võib valgusisaldus olla vahemikus 0,033 kuni 10-15 g / l, mõnikord suurem.

Kvalitatiivne määratlus.

Meetodi põhimõte: põhineb sellel, et valk koaguleerub (muutub nähtavaks) anorgaaniliste hapete toimel. Hägususe aste sõltub valgu kogusest.

Valgu tuvastamine uriinis 20% sulfosalitsüülhappega.

Reaktiivid: 20% sulfosalitsüülhappe lahus. Varustus: tume taust.

Uurimise edenemine:

2. Valage 2 ml ettevalmistatud uriini 2 sama läbimõõduga katseklaasi. 1 katseklaas - kontroll, 2 - katse. Katseklaasi lisatakse 4 tilka 20% sulfosalitsüülhapet.

3. Tulemus märgitakse tumedale taustale.

4. Valgu olemasolul muutub uriin katseklaasis häguseks.

Valgu kvalitatiivne määramine uriinianalüüsis - ribad.

Proteinuuria tuvastamiseks kasutatakse erinevaid monoteste - ribasid: Albufan, Albustics, Biofan E ja polüteste: Triscan, Nonafan jne.

Kvantifikatsioon.

Valgu tuvastamine uriinis Roberts-Stolnikovi meetodil.

Meetodi põhimõte: põhineb sellel, et valk koaguleerub (muutub nähtavaks) anorgaaniliste hapete toimel. Hägususaste sõltub valgu kogusest (st Gelleri ringtest). Kui valgu kontsentratsioon uriinis on 0,033 g / l, ilmub 3 minuti lõpuks pärast uriini kihistumist õhuke niiditaoline valge rõngas.

Reaktiivid: 50% lämmastikhappe lahus või Robertsi reaktiiv (98 osa naatriumkloriidi küllastunud lahust ja 2 osa kontsentreeritud vesinikkloriidhapet) või Larionova reaktiiv (98 osa naatriumkloriidi küllastunud lahust ja 2 osa kontsentreeritud lämmastikhapet).

Varustus: tume taust.

Uurimise edenemine:

1. Nõuded uriinile: uriin peab olema happelise (või kergelt happelise) pH-ga, läbipaistev, selleks uriin tsentrifuugitakse. Aluseline uriin hapestatakse söötme kergelt happelise reaktsioonini, kasutades kontrollimiseks indikaatorpaberit.

2. Valage katseklaasi 2 ml 50% lämmastikhappe lahust või ühte reaktiividest, seejärel asetage pipeti abil ettevaatlikult piki katseklaasi seina sama kogus valmistatud uriini.

3. Proov jäetakse 3 minutiks seisma.

4. 3 minuti pärast lugege tulemust. Tulemus märgitakse läbiva valguse tumedal taustal. Kui rõngas on lai, kompaktne, lahjendatakse uriin destilleeritud veega ja kantakse uuesti reagendile.

5. Uriini lahjendatakse, kuni 3 minuti pärast moodustub õhuke niiditaoline rõngas.

C = 0,033 g / l x lahjendusmäär.